Пептонный агар — это распространенная среда для культивирования микроорганизмов, используемая в микробиологии. Она имеет довольно простой состав и способ приготовления, при этом ее свойства позволяют культивировать много различных бактерий.
Пептонный или мясопептонный агар находит применение в различных областях медицины и микробиологии:
-
Клиническая микробиология. Используется для выделения и идентификации патогенных микроорганизмов из образцов клинического материала (кровь, моча, а также другие биологические жидкости). Среда применяется для изучения возбудителей инфекционных заболеваний, включая бактерии, вирусы, грибы и простейшие;
-
Антибиотикочувствительность. Используется в тестах на чувствительность бактерий к антибиотикам, что помогает в выборе эффективной терапии;
-
Фармацевтические исследования. Применяется для разработки и контроля качества биопрепаратов, таких как вакцины или сыворотки;
-
Пищевая микробиология. Используется для контроля и оценки микробной обсемененности продуктов питания;
-
Экологическая микробиология. Применяется для изучения бактерий, обитающих в различных экологических системах, таких как почва и вода.
Он является важным инструментом для микробиологов и врачей, позволяя проводить исследования и диагностику, которые способствуют улучшению здоровья и повышению безопасности. Среда используется для выращивания широкого спектра микроорганизмов, включая грамположительные и грамотрицательные бактерии, анаэробы, дрожжи, плесени, а также простейших.
Состав пептонного агара
Исходным материалом для приготовления этой питательной среды служит мясной бульон. Эта прозрачная жидкость светло-желтого цвета с кислой реакцией богата белками и другим веществами натурального происхождения. Пептон, получаемый из белков, обеспечивает источник аминокислот и пептидов для питания растущей культуры. Солевой раствор регулирует осмотическое давление и поддерживает стабильность среды. К жидкому бульону он добавляется для придачи смеси нужную плотность и консистенцию для посева образцов.
Это вещество органического происхождения, которое получают из морских водорослей. Оно богато углеводами, которые относятся к группе полисахаридов и имеют свойство придавать смесям консистенцию желе. При добавлении в жидкие смеси он придает им повышенную плотность, обеспечивая расплавление только при закипании среды. Температуру плавления агара составляет 80-86 градусов, затвердевает он при 36-40 градусах. Эти свойства агара позволяют культивировать многие микроорганизмы с учетом условий для их жизнедеятельности
Технология приготовления пептонного агара
Для приготовления этой питательной среды требуется концентрированный бульон с мясопептонной основой. Колбу Эрленмейера достаточного объема (обычно на несколько литров), выполненную из устойчивого к нагреву стекла, заполняют ингредиентами для МПА. Объем лабораторной посуды обычно при этом составляет до 2 литров. В колбу наливают концентрированный мясопептонный бульон, а также измельченный. Колбу ставят на слабый огонь для расплавления агара, не затыкая емкость пробкой.
Реакция бульона, используемого для приготовления МПА, должна иметь показатель 7,4 с учетом последующей стерилизации готовой среды. При обработке мясопептонного агара в стерилизационном оборудовании рН обычно снижается примерно на 0,2 единиц. Определить реакцию МПА можно при полном расплавлении агаровой составляющей. Вещество высокого качества обычно не дает видимого осадка, поэтому среда не требует дополнительного осветления. После проверки показателя кислотности готовой среды ее кипятят в течение 12-15 минут, а затем фильтруют через ватный фильтр. МПА разливают в соответствующие методике посева емкости (пробирки или колбы) для последующего автоклавирования при температуре 120 градусов в течение 20 минут.
При использовании агара недостаточной степени чистоты может выпадать видимый осадок. При помутнении МПА его следует осветлить перед стерилизацией в автоклаве. В этом случае к мясопептонному агару после расплавления желирующего компонента и охлаждения смеси до температуры 50 градусов добавляется растворенный в 30 мл воды яичный белок. Перед добавлением в МПА белок взбивается до состояния пены с расчетом одно яйцо на литр воды. МПА с белком хорошо взбалтывают и стерилизуют в автоклаве в течение 10 минут при температуре 120 градусов. При закипании среды яичный белок свертывается, разрушаясь и связывая видимый осадок. После осветления он фильтруется через большую воронку с ватно-марлевым фильтром. Фильтрацию кипящего МПА следует проводить быстро, так как смесь быстро остывает и застывает при понижении температуры. Готовую осветленную среду разливают в пробирки объемом 5 или 10 мл, далее стерилизуют их в автоклаве в указанном выше режиме.
Стерильный мясопептонный агар, разлитый в пробирки по 5 мл, используется для посева микроорганизмов по «скошенной» методике. Для этого пробирки с готовой стерильной средой ставят в штатив в наклонном положении так, чтобы МПА не касался пробки. В результате смесь застывает определенным образом – получается скошенный или косой. Второй можно хранить не более недели, так как его поверхность высыхает, становясь непригодной для посева. Пробирки объемом 10 мл ставятся в штативы вертикально для застывания среды в виде столбика для посева «уколом» или другой технологии культивирования микроорганизмов.
МПА является довольно распространенной питательной средой для посева в лабораторных условиях. Мясопептонный широко применяется в различных микробиологических исследованиях как в «простом виде» с оригинальным составом, так и с добавлением дополнительных компонентов. Обогащение состава МПА дополнительными ингредиентами в виде углеводов позволяет использовать его как дифференциально-диагностическую среду для более специфичных исследований. Состав может быть дополнен различными индикаторами, что позволяет различать разные группы бактерий на основе их метаболической активности.
Эта среда является практически универсальной, поэтому получила широкое распространение в лабораториях. Производители реактивов сегодня предлагают готовые сухие смеси мясопептонных агаров, навеску которых достаточно растворить в нужном объеме воды. Рекомендации по дальнейшей обработке указываются производителем, а состав соответствует действующим стандартам качества. Сухие смеси поставляются расфасованными в герметичные пластиковые банки, поэтому их удобно хранить. Есть также готовые пластины МПА, которые следует хранить в холодильнике, не вскрывая до использования во избежание высыхания поверхности и потери физико-химических свойств. Некоторые производители предлагают МПА в жидком виде, разлитый в стеклянные флаконы. Готовые мясопептонные агары содержат все необходимые вещества либо может быть дополнительно обогащен нужными компонентами в процессе приготовления среды в лаборатории.
